Goat Anti-Rabbit IgG Magnetic Beads

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Product Description

说明书

Goat Anti-Rabbit IgG Magnetic Beads                                

产品包装:

产品描述:

Goat Anti-Rabbit IgG磁珠来源于高品质山羊抗兔IgG纯化抗体,与直径为2μm的聚合物磁珠共价偶联。本产品可用于兔IgG的免疫沉淀(IP)和兔IgG纯化,在特定场景中可作为Protein A磁珠的替代方案。

产品性能:

产品形式:Goat Anti-Rabbit IgG磁珠保存在PBS,pH7.4添加防腐剂的缓冲液中,以10mg/ml的悬浮液形式提供。

保存条件:

Goat Anti-Rabbit IgG磁珠采用蓝冰运输。建议在2-8℃下储存,可稳定保存2年。请勿-20℃保存。

注意事项和免责声明:

本产品仅限于科学研究使用,不得用于临床诊断或治疗。

使用说明:

一、样品制备

1. 建议将蛋白裂解液控制在pH6-8,NaCl或KCl浓度≥0.15M可获得较好的实验效果。

2. 蛋白裂解液需要离心(10000×g,15min)才能去除干扰蛋白质结合的细胞碎片和微粒。如想获得更好的实验效果,蛋白裂解液还可通过0.45 µm或0.22 µm滤器过滤。

二、免疫沉淀((Immunoprecipitation, IP)

对于IP反应,建议每个反应(1x10^6细胞 或500μL裂解液)使用20-30µL的磁珠。

1.轻轻重悬磁珠,取出适当的体积到合适的离心管中。置于磁力架上分离10秒,去除上清。

2.用10倍凝胶悬浮液体积的TBST清洗亲和凝胶,置于磁力架上分离10秒,弃上清,重复该步骤三次。

3.将500µL处理好的细胞裂解液添加到洗涤过的磁珠中。(可根据样品中目的蛋白丰度来调整裂解液的体积)。对于阳性对照,将500uL TBST 和4 µL 50 ng/µL Rabbit IgG(~200ng)添加到洗涤过的磁珠中。对于阴性对照,仅添加500uL的裂解缓冲液,不含蛋白质。

4.轻轻摇动(推荐使用旋转混匀仪)所有样品和对照1小时。为了提高结合效率,可将结合步骤延长至4℃过夜反应。

5.置于磁力架上分离10秒以收集磁珠。用移液器吸头(推荐使用细长的吸头或者1mL吸头上套200µL吸头来使用)去除上清液(注意防止吸头沾到磁珠)

6.用10倍磁珠悬浮液体积的 TBST清洗磁珠三次。

三、洗脱:

本产品根据不同的下游应用要求等,可使用多种洗脱方法,包括酸性和SDS-PAGE上样缓冲液等洗脱液进行洗脱。

1、酸性洗脱法:本方法为非变性法,比较快速且高效。洗脱后的蛋白保持原有的生物活性,便于后续分析检测。

每10uL原始凝胶悬浮液,加入100ul酸性洗脱液(0.1M 甘氨酸,pH2-3),混匀后置于旋转混合仪上,室温孵育10分钟。孵育完毕后,置于磁力架上分离10秒,将上清转移到新的离心管中,并立刻加入10uL中和液(1M Tris-HCl, pH9.0),混匀。为了获得最大的洗脱效率,可重复上述步骤,并将相同样品合并。

洗脱并中和的目的蛋白置于4℃待用,或者-20℃或-80℃长期保存。

注:1)酸性洗脱法虽然高效,但仍可能低于SDS-PAGE上样缓冲液洗脱法。

2)由于目的蛋白的差异可能对酸性洗脱法的洗脱效率有一定的影响,如果对洗脱效率的要求比较高,可对酸性洗脱液的pH在2.5-3.1之间进行一定的调整,相应的中和液的pH值或量也要进行一定的调整。

2、 SDS-PAGE上样缓冲液洗脱法:本方法为变性法,得到的蛋白样品适合SDS-PAGE电泳或Western Blot检测。每20μL原始凝胶磁珠悬液体积,加入20μL 2X SDS-PAGE上样缓冲液,95ºC加热5分钟。置于磁力架上分离10秒,取上清进行SDS-PAGE电泳或WB检测。

注:由于上样缓冲液中SDS会破坏Goat Anti-Rabbit IgG,所以SDS煮样洗脱后的磁珠不能重复使用。